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樣品去鹽技術(shù)
更新時間:2011-07-05 點擊量:1905

樣品去鹽技術(shù)

在免疫酶技術(shù)中,抗原、抗體、酶及酶標(biāo)記抗體(或抗原)在分離與純化過程中,常常會碰到去鹽這一實驗環(huán)節(jié)。經(jīng)過去鹽,蛋白質(zhì)溶液中不必要的無機鹽分子得以去除,從而使蛋白進一步純化與穩(wěn)定。常用的去鹽技術(shù)如下:

1.透析

適用于體積不太大的蛋白質(zhì)溶液,簡單方便,效果理想但費時。

2.凝膠過濾

適用于體積中等的蛋白質(zhì)溶液,簡便快速,效果理想,但去鹽后的蛋白質(zhì)溶液體積增大較多。

3.超濾

適用于體積較大的蛋白質(zhì)溶液,去鹽速度快,同時具有濃縮作用,但由于膜吸附作用,樣品丟失較多。

4.透析

實驗室常用的去鹽方法是透析法。

在透析法中所使用的透析袋,是一種斗透膜。半透膜具有使小分子或離子透過,而蛋白質(zhì)分子不能通過的特性。將蛋白質(zhì)溶液裝入透析袋內(nèi),浸泡于蒸餾水中,由于膜內(nèi)外可擴散離子濃度的差別,使蛋白質(zhì)溶液中的無機鹽分子向膜外蒸餾水中擴散。如果經(jīng)常更換蒸餾水,則可將蛋白質(zhì)溶液中的鹽類分子全部除去,這就是半透膜的去鹽透析原理。假若膜外不是蒸餾水而是緩沖液,可以經(jīng)過膜內(nèi)外離子的相互擴散,改變蛋白質(zhì)溶液的無機鹽成分,這就是半透膜的平衡透析原理。在離子交換層析前經(jīng)常進行平衡透析處理。

半透膜透析去鹽過程如下:

(1)               依據(jù)樣品量的多少,剪取一段半透膜,浸在蒸餾水中一段時間,然后再用蒸餾水沖洗。

(2)               使用時,將半透膜一端折疊,封閉使之成底端,并用滴管加入蒸餾水檢查是否漏水。

(3)               10002000ml大燒杯中注滿水,燒杯口上擱置一玻棒。

(4)               倒盡膜內(nèi)蒸餾水,然后加入蛋白質(zhì)樣品液(不能裝得太滿,以免脹裂),用橡皮筋扎牢管的上端,懸掛在玻璃棒中央,放入蒸餾水燒杯中。

(5)               將蒸餾水燒杯置于4℃冰箱中透析23天,每天換水3次以上。如果置于磁力攪拌器上攪拌透析,則去鹽效果更好。要經(jīng)常檢查透析袋的扎口是否緊密,以防漏液。

(6)               按不同樣品要求去除不同無機鹽離子,可用特定的指示劑測定zui后透析用過的蒸餾水中是否還含有這種離子。

5.討論

1)蛋白質(zhì)樣品的濃度應(yīng)透析后測定,因為經(jīng)過半透膜透析,膜內(nèi)滲透壓高于膜外,水分子會進入膜內(nèi),所以在去鹽以后,蛋白質(zhì)溶液體積會相應(yīng)增大。

2)有時會在透析袋內(nèi)發(fā)生沉淀,一般而言,通過離心去除并不影響蛋白質(zhì)樣品的性質(zhì)。

 3)透析袋在生理鹽水中浸洗后,還可繼續(xù)使用。

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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