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怎樣縮小ELISA實驗中的誤差
更新時間:2011-09-09 點擊量:1758

怎樣縮小ELISA實驗中的誤差

 

   在自然因素(試劑穩(wěn)定性、準確率、儀器精密度)和人為因素(操作者)并存的情況下,要準確報告實驗結果,尚為一個值得探討的話題。現(xiàn)從以下方面加以討論。

 1)檢驗技師應具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗。能熟練操作實驗儀器、器械,具有一定總結和分析問題的能力,對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。

 2)使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。

  (3) 評估試劑的實用性。試劑的穩(wěn)定與否,對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用。

 4)操作前仔細閱讀說明書。嚴格按照說明書要求進行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方,反復試驗確定成立后才能改進,比如洗板次數(shù)的掌握等。

   (5) 加樣要準確、快速?;瘜W理論表明,生成物的量與反應物的量成正相關。加樣不準確,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結果。另外,顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關,所以加樣應慎重。要求在一定時間內(nèi)加樣完畢的實驗,如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長時間暴露在外,尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效。

  6)洗滌*。洗板不*,酶結合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。另外,洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽性。

  7)嚴控反應時間。反應時間過長,酶失活;反應時間過短,酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結合,生成物結構松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。

  8)嚴格掌握顯色時間。顯色時間過短,加入終止液反應終止后,底物結合物的量過少,易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色,應判為假陽性,這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色,不可報陽性,這可能是本底顯色的結果。

  9)注意試劑保存期,過保存期的試劑不能使用。

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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