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甘油三酯( TG) 含量檢測試劑盒說明書
更新時間:2025-07-03 點擊量:79

甘油三酯( TG) 含量檢測試劑盒說明書

注意:正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

規(guī)格:100T/96S 產(chǎn)品內(nèi)容:

試劑一:自備,取玻璃空瓶,加入 60mL 正庚烷,60mL 異丙醇,蓋緊后混勻,4℃保存。

試劑二:液體 3mL×1 瓶,4℃保存。試劑三:液體 10mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3mL×1 瓶,4℃避光保存。試劑五:液體 10mL×1 瓶,4℃避光保存。試劑六:液體 10mL×1 瓶,4℃避光保存。

標準品:粉劑×1 瓶,臨用前加 5mL 試劑一,即 1mg/mL 甘油三酯標準溶液,4℃保存。

產(chǎn)品說明:

TG 是長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,不僅是細胞膜的主要成分,也是重要呼吸底物。 測定原理: 用異丙醇抽提取 TG,KOH 皂化 TG 后水解生成甘油及脂肪酸,過碘酸氧化甘油生成甲醛, 在氯離子存在下甲醛與乙酰丙酮縮合生成黃色物質(zhì),在 420 nm 有特征吸收峰,其顏色的深淺與 TG 含量成正比。

自備儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、微量比色皿/96 孔板、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、雙蒸水、125mL 玻璃空瓶。

操作步驟:

一、TG 的提?。?/p>

1、 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL 試劑一)進行冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清待測。

2、 細胞、細菌:先收集 400-500 萬細胞或細菌到離心管內(nèi),棄上清,加 1mL 試劑一,超聲波破碎

1min(強度 20%,超聲 2s,停 1s),8000g, 4℃離心 10min,取上清待測。

3、 血清(漿)等液體樣品:直接測定。二、測定操作:

1.分光光度計/酶標儀預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長到 420 nm,蒸餾水調(diào)零。

2.水浴鍋預(yù)熱到 65℃。

空白管標準管測定管

雙蒸水(µL)40

標準液(µL)40

TG 待測液(µL)40

試劑一(µL)125125125

試劑二(µL)252525

加試劑一后充分混勻,再加試劑二,劇烈振蕩 30s,靜置,待分層后取上層溶液 15µL,置于新的 EP 管中。

3.甘油三酯含量測定:

空白管標準管測定管

上層溶液(µL)151515

試劑三 (µL)505050

試劑四(µL)151515

充分混勻,65℃水浴 3min

試劑五(µL)505050

試劑六(µL)505050

充分混勻,65℃水浴 15min

轉(zhuǎn)移至微量比色皿/96 孔板測定 420nm 處吸光度,記為 A 空,A 標和 A 測。注意:空白管和標準管只需測定一次。

三、計算公式:

1.血清(漿)中甘油三酯含量:

TG 含量(mg/dL)=C  標準品×(A 測-A 空)÷(A 標-A 空)

=(A 測-A 空)÷(A 標-A 空)

C 標準品:1mg/mL;100:單位換算系數(shù),1dL=100 mL。

2.組織中甘油三酯含量:

(1)按樣本蛋白濃度計算

TG 含量(mg/ mg prot)= C  標準品×V×(A 測-A 空)÷(A 標-A 空)÷(Cpr×V)

=(A 測-A 空)÷(A 標-A 空)÷ Cpr

(2)按樣本鮮重計算

TG 含量(mg/ g 鮮重)=C  標準品×V×(A 測-A 空)÷(A 標-A 空)÷W

=(A 測-A 空)÷(A 標-A 空)÷ W

C 標準品:1mg/mL ;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;V:加入試劑一的體積,

1mL。

3.細胞、細菌中甘油三酯含量:

TG 含量(mg/104 cell)=C 標準品×(A 測-A 空)÷(A 標-A 空)÷細菌或細胞密度

=(A 測-A 空)÷(A 標-A 空)÷細菌或細胞密度

C 標準品:1mg/mL;細菌或細胞密度:104 cell /mL。

注意事項:

1.試劑盒中有易揮發(fā)性物質(zhì),實驗過程中需佩戴手套和口罩,試劑瓶蓋打開后應(yīng)該及時蓋緊。

2.加試劑二后需劇烈震蕩,使待測液中甘油三酯得到充分提取。

3.最低檢出限為 100µ mol/L。

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